尖锐湿疣的五种诊断好方法

（一）标本的采集及处理

1.标本的采集和预处理用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的pbs中，用pbs离心（3000g，10min）洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlpbs中，取0.5ml细胞悬液抽提。

2.标本核酸的提取按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液（10mmol/ltris-hcl,ph7.4，10mmol/ledta，150mmol/lnacl,0.4%sds，1.0mg/ml蛋白酶k）37℃下处理过夜。且等体积酚/氯仿（11），氯仿/异戊醇（241）各抽提2次。加1/10体积3mol/lnaac（ph5.2）及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀dna。加1体积乙醇洗涤1次。用60μl含rna酶（100μg/ml）的te液（10mmol/ltris-hcl，ph8.0，1.0mmol/ledta）溶解dna，37℃温育。

（二）pcr扩增

1.引物设计和合成hpv基因组可分为早期区（e）和晚期区（l），每区含一系列开放读码框架（orf）。序列分析表明，各型hpv的非编码区及e1、e6、e7和l1区均有保守序列。manos等从hpvl1区中选择保守序列设计合成引物my11和my09见表1,该引物与hpv6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型。