尖锐湿疣的五种诊断好方法

（4）将反应管置pcr扩增仪上，循环参数为95℃30s，55℃40s，72℃50s循环35次，最后72℃延伸5min。

4.每次试验应设阳性及阴性对照。以载有hpv的重组质粒（每反应为100pg）或含有hpv的细胞系（如癌ski、hela）dna为阳性对照，以无hpv的人细胞系dna为阴性对照。

（三）扩增产物的检测和分析

1.凝胶电泳扩增反应结束后，取出反应管，冷却至室温，取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外分析仪下分析结果，分子量约为450bp处出现明显的dna带。

2.核酸杂交如果凝胶电泳无清楚的dna或需确定dna带的特异性时，可用标记的公用混合探针和（或）型特异探针作southern吸印杂交、斑点杂交验证。

按照标准方法制32patp标记的寡核苷酸探针，需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×。106-5×。106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h，随后于30-55℃下用洗涤液（2×。ssc、0.1%sds）迅速冲洗杂交膜，除去多余探针。然后进行洗膜，其条件依所用探针而异公用混合探针，55℃洗膜10min。my12、my13及my16探针，56-57℃下10min，并换液重洗1次。my14及wd74探针，58-59℃下10min，亦换液重洗1次。用pcr方法检测hpv比核酸杂交方法优越。其敏感性高，gp-pcr方法以凝胶电泳直接分析结果，可检出标本中200个拷贝的hpvdna，若以核酸杂交检测pcr产物，敏感性提高，能检出10个拷贝的hpvdna。