2.pcr反应试剂taqdna聚合酶(2u/ml)、10mmol/ldntp贮备液(datp、dctp、dgtp、dttp各10mmol/l),10×。pcr缓冲液(500mmolkcl、40mmol/lmgcl2、100mmol/ltris-hcl、ph8.5),100μmol/lmy11和my09贮备液,灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
3.pcr扩增方法和程序以100μlpcr反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
(1)实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本dna外的其它各种pcr反应试剂。每支反应管中含有的pcr反应试剂。
(2)各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
(3)加入80-100μl石蜡油,在台式离心机上快速离心数秒钟,使各反应试剂收集于油层下。目前,pcr试剂已商品化,反应体积为25μl。使用时只加入标本dna即可。