一、基因诊断
迄今,hpv难于用传统的病毒培养及血清学技术检测,主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的pcr方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,为hpv检测开辟了新途径。
(一)标本的采集及处理
1.标本的采集和预处理用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时,将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的pbs中,用pbs离心(3000g,10min)洗涤2次,沉积细胞重悬于1mlpbs中,取0。5ml细胞悬液抽提dna。
2.标本核酸的提取按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/ltris-hcl,ph7.4,10mmol/ledta,150mmol/lnacl,0.4%sds,1.0mg/ml蛋白酶k)37℃下处理过夜。且等体积酚/氯仿(11),氯仿/异戊醇(241)各抽提2次。加1/10体积3mol/lnaac(ph5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀dna。加1体积乙醇洗涤1次。用60μl含rna酶(100μg/ml)的te液(10mmol/ltris-hcl,ph8.0,1.0mmol/ledta)溶解dna,37℃温育30min。