2、pcr扩增
(1)引物设计选择hsv-1icpo基因(极早期)为检测靶基因。设计2个引物,
p15′ggatcctcacgtggttacccgcggtct3′
p25′aagcttccggggccgtccccgcgggcg3′可以扩增icpo中266bp序列。
1个探针5′ccggctggagccgccgcaccctgct3′。
(2)pcr实验体系总反应体积为50μl,模板10μl(0.25-1.0μg)p11μl(20pmol/l)。p21μl(20pmol/l)。4×。dntp4μl(200μmol/l)。10×。缓冲液5μl。amv(逆转录酶)2μl(50u)。dw26μl。循环参数,94℃变性2min后94℃50s,60℃60,72℃60s,循环40次后72℃延伸5min。
3、扩增产物的鉴定
(1)琼脂糖凝胶电泳染色法取10μlpcr扩增产物加4μl样品缓冲液,混匀后加样2%琼脂糖凝胶板,70v电泳15-20min,eb染色5min。紫外灯下观察扩增条带。