pcr-ec法检测四种病毒结果
病毒型号靶片段
hsv2518bp—
cmv589bp不需酶切,第一步电泳就可以区分
(四)用rt-pcr检测单纯疱疹病毒
rna的聚合酶链反应(rna-pcr),可能通过检测hsv不同期的rna,这不仅可诊断hsv感染,而且有利于hsv的潜伏期感染机制的深入研究。
rt-pcr是以rna为模板经逆转录反应(rt)产生cdna,再以cdna为模板进行pcr扩增以达到检测目的。因此,rna-pcr也可称为rt-pcr。
1、标本处理
组织块细胞总rna提取,取100mg组织标本,加1ml硫氰酸胍变性液,于匀浆器中,室温研磨均匀后,移入2.5mleppendorf管中。依次加入0.1ml3mol/l(ph4.0)naac,1ml水饱和酚和0.2ml氯仿一异戊醇混匀,用力振摇10s,置冰浴15min。10000g4℃,离心20min,取上清水相(上层dna、下层dna和变性蛋白质)加入等体积异丙醇置-20℃1h,沉淀rna。离心15000r/min×。10min,弃上清,rna重新用0.3ml硫氰酸胍变性液溶解,再加0.3ml异丙醇沉淀,-20℃1h,沉淀rna.离心15000r/min×。10min,去上清,沉淀rna用75%冷乙醇洗一次,真空干燥。加10μlte缓冲液(ph7.4)溶解,低温保存备用。临用前冰浴溶解。