np-pcr的引物和探针序列
“外”引物
“内引物”
探针
(2)pcr实验体系和程序反应体积为50μl。模板10μl。bjhsv1.10.5μl(0.2pmol/l)。bjhsv1.20.5μl(0.2pmol/l)。10×。缓冲液5μl。4×。dntp4μl(4×。200mmol/l)。dw27μl。石蜡油30μl。循环参数为95℃30s。55℃30s。72℃60s。循环20次,取其扩增产物1μl加入含有bjhsv1.3和bjhsv1.4反应体系中进行套式扩增,先95℃变性2min,循环参数为95℃30s。55℃30s。72℃60s。循环30次后,72℃延伸5min。
(3)扩增产物分析
①琼脂糖凝胶电泳染色法
取扩增产物10μl点样于2%琼脂糖凝胶中,70v电泳15-20min,溴化乙锭染色5min,于紫外灯下观察结果,在溴酚兰后面有一条,或二条亮红条带为阳性结果,hsv-2带在前,hsv-1带在后,无带则为阴性结果。