(2)pcr实验体系。取模板10μldnap50.5(0.2μmol/l)dnap3-10.5μl(0.2μmol/l)dnap3-20.5μl(0.2μmol/l)4×。dntp8μl(4×。200μmol/l)10×。dntp8μl(4×。200μmol/l)。10×。缓冲液10μldmso4μl。加dw65.5μl。石蜡油30μl.。
水煮(96℃~100℃
加taqdna聚合酶1μ
72℃
↓
95℃
↓
65℃60s→72℃
↓33个循环
70℃
3.扩增产物的检测和分析
(1)琼脂糖凝胶电泳染色法取扩增产物20μl加样品缓冲液4μl混匀后,点样于2%琼脂糖凝胶板,70v电泳15~20min,溴化乙锭(eb)染色5min,于紫外灯下观察结果在溴酚蓝后面有一条或二条亮红带为阳性结果,hsv-2带在前,hsv-1带在后,无带则为阴性结果。
(2)xhoi酶谱法取hsv-1型pcr产物50μl加xhoi50u,37℃1h后,置3%琼脂糖凝胶中,70v电泳15~20min,可产生46bp片段带(引物后面)。与正常pcr产物比较,xhoi酶切后的大片段电泳位置前移。